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恩施D-生物素與酶結合參與體內二氧化碳的固定和羧化過程，與體內的重要代謝過程如丙酮酸羧化而轉變成為草酰乙酸，乙酰輔酶A羧化成為丙二酰輔酶A等糖及脂肪代謝中的主要生化反應有關。它也是某些微生物的生長因子，極微量（0.005微克）即可使試驗的細菌生長。例如，鏈孢霉生長時需要極微量的生物素。人體每天需要量約100～300微克。生雞蛋清中有一種抗生物素的蛋白質能和生物素結合，結合后的生物素不能由消化道吸收；造成動物體生物素缺乏，此時出現食欲不振、舌炎、皮屑性皮炎、脫毛等。然而，尚未見人類生物素缺乏病例，可能是由于除了食物來源以外，腸道細菌也能合成生物素之故。
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